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ETUDE DE LA REGULATION DE L’EXPRESSION DU FACTEUR ANGIOGENIQUE VEGF (VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR) DANS UN MODELE IN VITRO : LES CELLULES TUMORALES VESICALES RT4.

OBJECTIF : Etudier, dans les cellules tumorales vésicales humaines en culture, les mécanismes moléculaires pouvant intervenir dans la régulation de l’expression d’un facteur angiogénique : le VEGF reconnu comme un facteur clé de l’angiogenèse tumorale.
MATERIEL ET METHODES : Le modèle in vitro utilisé est la lignée cellulaire RT4 dérivée d’une tumeur vésicale humaine bien différenciée. L’étude des isoformes du VEGF a été réalisée par RT-PCR suivie d’une hybridation spécifique. Les cellules RT4 ont été stimulées ou non (contrôles) par un ester de phorbol : le Phorbol 12-Myristate 13-Acetate ou PMA (promoteur tumoral qui active les protéines kinases C (PKCs)). L’expression des ARN messagers (ARMm) du VEGF a été analysée par Northern blotting et la quantité de protéines VEGF dans les milieux conditionnés déterminée par une méthode ELISA. Les mécanismes moléculaires régulant l’expression des ARNm du VEGF sous l’effet du PMA ont été déterminés par l’étude de la stabilité des ARNm du VEGF (mesure de la ? vie) et par l’étude de l’effet d’inhibiteurs des PKCs (staurosporine et calphostine C).
RESULTATS : Les cellules RT4 expriment trois isoformes du VEGF (VEGF189, VEGF165, VEGF121). Le PMA augmente : 1) l’expression des ARNm du VEGF (transcrits de 4,5 Kb) avec un pic d’expression à 4 heures, 2) la quantité de protéines VEGF dans les milieux conditionnés de manière dose dépendante. La régulation de l’expression du VEGF par le PMA implique une augmentation de la stabilité des ARNm du VEGF (régulation post-transcriptionnelle) et la voie de signalisation des PKCs (inhibition de l’expression des ARNm du VEGF induits par le PMA par la staurosporine et la calphostine C).
CONCLUSION : Dans les cellules RT4, le PMA régule l’expression du VEGF selon un mécanisme post-transcriptionnel impliquant la voie des PKCs. L’utilisation d’inhibiteurs des PKCs pourrait représenter, par le contôle de l’expression du VEGF, une nouvelle approche thérapeutique pour les tumeurs épithéliales de vessie.

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