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Optimisation de l’extraction d’ARN en vue de quantification de l’activité télomérasique dans les urines des patients présentant une tumeur de vessie


But : Plusieurs études ont rapporté l’importance de la télomérase, enzyme qui maintient la longueur des télomères, au cours de la cancérogénèse. Le but de notre étude a été de mettre au point une technique pour évaluer l’expression de l’activité de la télomérase dans les urines chez les patients porteurs de tumeur de vessie.

Matériel et Méthodes : 80 patients ont été inclus dans ce protocole prospectif. Les urines ont été recueillies au moment de la résection endoscopique. Premier groupe (G1) : 40 échantillons d’urine (EU) selon la technique publiée : centrifugation puis un lavage au PBS et une congélation ont été faits pour chaque échantillon. La révélation de l’ARN par spectrophotométrie à 260nm est obtenue par RNA-BTM . Deuxième groupe (G2) : 40 échantillons optimisation de la technique : centrifugation supplémentaire à 3000G est effectuée après le lavage au PBS et la congélation est réalise sur culot sec.

La vérification a été réalisée par migration sur gel d’agarose à 0,7 % pour les 2 groupes.

Résultats :Dans le groupe 1 : seuls 3 EU ( 8 %) contenait de l’ARN permettant la quantification de l’activité telomérasique (AC). Dans le groupe 2, dans 25 EU (63 %)l’extraction d’ARN a été possible pour la quantification de l’AC.

Conclusion : La technique de référence publiée à ce jour qui ne permet pas de quantifié en routine l’ARN dans les urines fraîches peut être considérablement améliorée par la réalisation d’une optimisation de la centrifugation et l’inclusion des culots secs. Cette avancée ouvre le champs à un dépistage moléculaire des tumeurs de vessie applicable en routine.



SUBVENTIONNE PAR SANOFI SYNTHELABO

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